薄层色谱法实用
- 薄层色谱(TLC)是一种通过分离分析小样品的技术
- 例如,我们可以分离出一种染料,以确定法医样本中染料的混合物
- TLC分为两个阶段:
- 固定相
- 这种相通常是薄金属片涂层氧化铝(Al2O3.)或二氧化硅(SiO2)
- 溶质分子吸附在表面上
- 根据与固定相相互作用的强度,分离的组分将穿过板的特定距离
- 它们与固定相的相互作用越多,它们就越会“粘”在固定相上
- 流动相
- 流过固定相
- 它是一种极性或非极性液体(溶剂),携带被研究化合物的组分
- 极性溶剂——水或醇
- 非极性溶剂-烷烃
- 固定相
- 如果样品成分上色,它们的斑点在色谱图上很容易辨认
- 如果样品组件没有上色,那么我们可以定位把色谱图上的斑点用铅笔画出来
- 来定位我们可以使用的斑点:
- 紫外线
- 茚三酮(致癌)
- 碘蒸气
- 来定位我们可以使用的斑点:
薄层色谱分析
- 步骤1:
准备一个烧杯,加入少量溶剂
- 步骤2:
在薄层色谱板的底边画一条水平线(用铅笔)
这叫做基线 - 步骤3:在这条线的左边放置一点纯参考化合物,然后在基线的右边放置一点待分析样品,并让其风干
参考化合物可用于鉴定样品中化合物的混合物
- 步骤4:
将薄层色谱板放入有溶剂的烧杯内-确保溶剂没有盖住斑点-并放置盖子盖住烧杯
溶剂将开始沿着平板向上移动,溶解化合物 - 步骤5:当溶剂到达顶部时,取下板,在溶剂到达的地方画另一条铅笔线,表示溶剂前
样品的组分会分离并向上移动到溶剂前端
样品的一个点被放置在基线上,并允许分离作为流动相流过固定相;参比化合物也会随着溶剂移动
TLC和Rf值
Rf值
- 薄层色谱板可用于计算Rf化合物的值
Rf=
- 这些值可以与其他分析数据一起使用,以推断混合物的组成
Rf值可以通过从TLC板上进行2次测量来计算
考试技巧
薄层色谱板上的基线必须用铅笔绘制。任何其他介质都会与样品成分和分析过程中使用的溶剂相互作用。
- 极性较弱的组分沿薄层色谱板向上移动
- 他们的Rf数值更高比那些更接近基线的人
- 他们是更多的可溶性在流动相中,和溶剂一起进行
- 更多的极性成分不会向板块上方移动很远
- 它们更容易被极性固定相吸引
- 所研究样品中分子的分离程度取决于流动相和固定相的溶解度
- 认识Rf所分析化合物的值有助于比较不同分子的极性
工作的例子
用薄层色谱法(TLC)分析氨基酸混合物。制作的TLC板如下图所示。用R值表识别样品中的氨基酸f。
答案:
蓝色的点Rfvalue = 2.82 ÷ 4.63= 0.61 =亮氨酸
绿色的地方Rfvalue = 2.45 ÷ 4.63= 0.536 =异亮氨酸
红斑Rfvalue = 2.04 ÷ 4.63= 0.44 =缬氨酸